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- 确保数据准确性:紫外可见分光光度计的日常校准与验证方法
- 点击次数:105 更新时间:2025-10-27
- 紫外可见分光光度计的日常校准与验证是确保数据准确性的关键,主要包括波长校准、吸光度校准、基线校准及性能验证,具体方法如下:一、波长校准使用标准灯:利用汞灯或氘灯的特征发射谱线(如汞灯的253.7nm、365nm)进行校准。将仪器设定在特定波长,放置校准灯,调整光路使其通过样品池,观察吸收峰并记录实际波长值,与标准波长对比,偏差超通过仪器内置功能或手动调节光栅修正。使用标准滤光片:采用Ho³⁺掺杂玻璃滤光片,扫描其特征吸收峰(如418nm、450nm),修正波长示值。该方法无需复杂光源切换,但需定期更换滤光片(建议每年1次)。二、吸光度校准透射比标准溶液法:可见区:使用硫酸铜溶液(CuSO₄·5H₂O,λ=640nm,A=0.5)。紫外区:使用重铬酸钾溶液(K₂Cr₂O₇,λ=350nm,A=0.5)。配制要求:使用分析纯试剂与一级容量瓶,溶液保质期不超过7天。采用1cm石英比色皿,以空气为参比,测量前需用参比液润洗样品池3次。要求连续3次测量RSD≤0.3%,否则需重新装液。中性滤光片法:当吸光度>1.5AU时,引入中性滤光片组合(如OD=0.5+1.0叠加),通过多点拟合修正Beer定律偏离。三、基线校准使用空白溶剂(如蒸馏水)作为参比,测量其吸光度。调整仪器的基线调节装置,使空白溶剂的吸光度值为零。重复测量几次,确保基线稳定。四、性能验证精度验证:准备一系列不同浓度的标准溶液,分别测量每个标准溶液的吸光度,计算其平均值和标准偏差,评估仪器的精度。重复性验证:使用同一标准溶液,连续测量多次,计算每次测量的吸光度值,求其平均值和标准偏差,评估仪器的重复性。线性验证:准备一系列不同浓度的标准溶液,分别测量每个标准溶液的吸光度,绘制吸光度-浓度曲线,计算曲线的线性相关系数,评估仪器的线性。
